分子生物學常用溶液配制

一、分子生物學常用貯存液的配制

1．30%丙烯酰胺溶液

【配制方法】將29g丙烯酰胺和1g N，N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中。加熱至37℃溶解之，補加水至終體積為100ml。用濾器（0.45μm孔徑）過濾除菌，查證該溶液的pH值應不大于7.0，置棕色瓶中保存于室溫。

【注意】丙烯酰胺具有很強的神經(jīng)毒性并可以通過皮膚吸收，其作用具累積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時應戴手套和面具?？烧J為聚丙烯酰胺無毒，但也應謹慎操作，因為它還可能會含有少量未聚合材料。

一些價格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子，在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體積的單床混合樹脂（MB-1Mallinckrodt），攪拌過夜，然后用Whatman 1號濾紙過濾以純化之。

在貯存期間，丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會緩慢轉(zhuǎn)化成丙烯酰和雙丙烯酸。

2．40%丙烯酰胺

【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA測序級）和20g N，N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為600ml的蒸餾水中。繼續(xù)按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法處理，但加熱溶解后應以蒸餾水補足至終體積為1L。

【注意】見上述配制30%丙烯酰胺的說明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列測定。

3．放線菌素D溶液

【配制方法】把20mg放線菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1:10稀釋貯存液，用100%乙醇作空白對照讀取OD₄₄₀值。放線菌素D（分子量為1255）純品在水溶液中的摩爾消化系數(shù)為21，900，故而1mg/ml的放線菌素D溶液在440nm處的吸光值為0.182，放線菌素D的貯存液應放在包有箔片的試管中，保存于-20℃。

【注意】放線菌素D是致畸劑和致癌劑,配制該溶液時必須戴手套并在通風櫥內(nèi)操作,而不能在開放在實驗桌面上進行,謹防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。

藥廠提供的作治療用途的放線菌素D制品常含有糖或鹽等添加劑。只要通過測量貯存液在440nm波長處的光吸收確定放線菌素D的濃度，這類制品便可用于抑制自身引導作用。

4．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液

【配制方法】在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH調(diào)至pH值至7.0，用蒸餾水定容1ml，分裝成小份保存于-70℃

5．10mol/L乙酸酰溶液

【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后過濾除菌。

6．10%過硫酸銨溶液

【配制方法】把1g過硫酸銨溶解于終量為10ml的水溶液中，該溶液可在4℃保存數(shù)周。

7．BCIP溶液

【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二鈉鹽（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃

8．2×BES緩沖鹽溶液

【配制方法】用總體積90ml的蒸餾水溶解1.07g鹽溶液BES[N，N-雙（2-羥乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na₂HPO₄，室溫下用HCl調(diào)節(jié)該溶液的pH值至6.96、然后加入蒸餾水定容至100ml，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成小份，保存于-20℃。

9．1mol/L CaCl₂溶液

【配制方法】在200ml蒸餾水中溶解54g CaCl₂·6H₂O，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成10ml小份貯存于-20℃。

【注意】制備感受態(tài)細胞時，取出一小份解凍并用蒸餾水稀釋至100ml，用Nalgene濾器（0.45μm孔徑）過濾除菌，然后驟冷至0℃。

10．2.5mol/L CaCl₂溶液

【配制方法】在20ml蒸餾水中溶解13.5g CaCl₂·6H₂O，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成1ml小份貯存于-20℃。

11．1mol/L二硫蘇糖醇（DTT）溶液

【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸鈉溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，過濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-20℃。

【注意】DTT或含有DTT的溶液不能進行高壓處理。

12．脫氧核苷三磷酸（dNTP）溶液

【配制方法】把每一種dNTP溶解于水至濃度各為100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris堿分別調(diào)節(jié)每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH試紙檢測），把中和后的每種dNTP溶液各取一份作適當稀釋，在下表中給出的波長下讀取光密度計算出每種dNTP的實際濃度，然后用水稀釋成終濃度為50mmol/L的dNTP，分裝成小份貯存于-70℃。

比色杯光徑為1cm時,吸光度=εM

13．0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液

【配制方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na·2H₂O），在磁力攪拌器上劇烈攪拌，用NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值至8.0（約需20g NaOH顆粒）然后定容至1L，分裝后高壓滅菌備用。

【注意】EDTA二鈉鹽需加入NaOH將溶液的pH值調(diào)至接近8.0,才能*溶解。

14．溴化乙錠（10mg/ml溶液）

【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙錠，磁力攪拌數(shù)小時以確保其*溶解，然后用鋁箔包裹容器或轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，保存于室溫。

【注意】小心：溴化乙錠是強誘變劑并有中度毒性，使用含有這種染料的溶液時務必戴上手套，稱量染料時要戴面罩。

15．2×HEPES緩沖鹽溶液

【配制方法】用總量為90ml的蒸餾水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na₂PO₄·2H₂O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH調(diào)節(jié)pH值至7.05，再用蒸餾水定容至100ml。用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成5ml小份，貯存于-20℃。

16．IPTG溶液

【配制方法】IPTG為異丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量為238.3），在8ml蒸餾水中溶解2g IPTG后，用蒸餾水定容至10ml，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成1ml小份貯存于-20℃。

17．1mol/L乙酸鎂溶液

【配制方法】在800ml水中溶解214.46g四水乙酸鎂，用水定容至1L過濾除菌。

18．1mol/L MgCl₂溶液

【配制方法】在800ml水中溶解203.4g MgCl₂·6H₂O，用水定容至1L，分裝成小份并高壓滅菌備用。

【注意】MgCl₂極易潮解，應選購小瓶（如100g）試劑，啟用新瓶后勿長期存放。

19．β-巰基乙醇（BME）溶液

【配制方法】一般得到的是14.4mol/L溶液，應裝在棕色瓶中保存于4℃。

【注意】BME或含有BME的溶液不能高壓處理。

20．NBT溶液

【配制方法】把0.5g氯化氮藍四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃。

21．酚/溶液

【配制方法】把酚和等體積混合后用0.1mol/L Tris·HCl(pH7.6)抽提幾次以平衡這混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆蓋等體積的0.01mol/l Tris·HCl(pH=7.6)液層,保存于4℃。

【注意】酚腐蝕性很強，并可引起嚴重灼傷，操作時應戴手套及防護鏡，穿防護服。所有操作均應在化學通風櫥中進行。與酚接觸過的部位皮膚應用大量的水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。

22．10mmol/L苯（PMSF）溶液

【配制方法】用異丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分裝成小份貯存于-20℃。如有必要可配成濃度高達17.4mg/ml的貯存液（100mmol/L）。

【注意】PMSF嚴重損害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚，吸入、吞進或通過皮膚吸收后有致命危險。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF，應立即用大量水沖洗之。凡被PMSF污染的衣物應予丟棄。

PMSF在水溶液中不穩(wěn)定。應在使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加于裂解緩沖液中。PMSF在水溶液中的活性喪失速率隨pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值為8.0時,20μmmol/l PMSF水溶液的半壽期大約為85min，這表明將PMSF溶液調(diào)節(jié)為堿性（pH>8.6）并在室溫放置數(shù)小時后,可安全地予以丟棄。

23．磷酸鹽緩沖溶液（PBS）溶液

【配制方法】在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na₂HPO₄和0.24g KH₂PO₄,用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in²(1034×10⁵Pa)高壓下蒸氣滅菌20min。保存于室溫。

24．1mol/L乙酸鉀（pH=7.5）溶液

【配制方法】將9.82g乙酸鉀溶解于90ml純水中，用2mol/L乙酸調(diào)節(jié)pH值至7.5后加入純水定容到1L，保存于-20℃。

25．乙酸鉀溶液（用于堿裂解）

【配制方法】在60ml 5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度為5mol/L的溶液。

26．3mol/L乙酸鈉（pH5.2和pH7.0）溶液

【配制方法】在80ml水中溶解408.1g三水乙酸鈉，用冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2或用稀乙酸調(diào)節(jié)pH值至7.0，加水定容到1L，分裝后高壓滅菌。

27．5mol/L NaCl溶液

【配制方法】在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分裝后高壓滅菌。

28．10%十二烷基*（SDS）溶液

【配制方法】在900ml水中溶解100g電泳級SDS，加熱至68℃助溶，加入幾滴濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分裝備用。

【注意】SDS的微細晶粒易擴散，因此稱量時要戴面罩，稱量完畢后要清除殘留在稱量工作區(qū)和天平上的SDS，10%SDS溶液無須滅菌。

29．20×SSC溶液

【配制方法】在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g檸檬酸鈉，加入數(shù)滴10mol/l NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0，加水定容至1L，分裝后高壓滅菌。

30．20×SSPE溶液

【配制方法】在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH₂PO₄·H₂O和7.4g EDTA,用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7.4（約需6.5ml 10ml/L NaOH）,加水定容至1L,分裝后高壓滅菌。

31．100%三氯乙酸溶液

【配制方法】在裝有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。

32．1mol/L Tris溶液

【配制方法】在800ml水中溶解121.91g Tris堿,加入濃HCl調(diào)節(jié)pH值至所需值。

pHHCl     7.4 70ml          7.6 60ml             8.0 42ml

應使溶液冷至室溫后方可zui后調(diào)定pH值，加水定容至1L，分裝后高壓滅菌。

【注意】如1mol/L溶液呈現(xiàn)黃色，應予丟棄并置備質(zhì)量更好的Tris。

盡管多種類型的電極均不能準確測量Tris溶液的pH值，但仍可向大多數(shù)廠商購得合適的電極。

Tris溶液的pH值因溫度而異，溫度每升高1℃，pH值大約降低0.03個單位。例如：0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃時的pH值分別為9.5、8.9和8.6。

33．Tris緩沖鹽溶液（TBS）（25mmol/l Tris）

【配制方法】在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris堿，加入0.015g酚并用HCl調(diào)至pH值至7.4，用蒸餾水定容至1L，分裝后在151bf/in2(1.034×10⁵Pa)高壓下蒸汽滅菌20min，于室溫保存。

34．X-gal溶液

【配制方法】X-gal為5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二甲基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的貯存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，裝有X-gal溶液的試管須用鋁箔封裹以防因受光照而被破壞，并應貯存于-20℃。X-gal溶液無須過濾除菌。

二、常用抗生素溶液

a：以乙醇為溶劑的抗生素溶液無須除菌處理。所有抗生素溶液均應放于不透光的容器保存。

b：鎂離子是四環(huán)素的拮抗劑，四環(huán)素抗性菌的篩選應使用不含鎂鹽的培養(yǎng)基（如LB培養(yǎng)基）。

三、常用的電泳緩沖液